Molecular characterization of environmental Cryptococcus neoformans isolated in Vitoria, ES, Brazil / Caracterização molecular de cepas ambientais de Cryptococcus neoformans isoladas em Vitória, ES, Brasil

Cryptococcus neoformans is the major cause of fungal meningitis, a potentially lethal mycosis. Bird excreta can be considered a significant environmental reservoir of this species in urban areas, thirty-three samples of pigeon excreta were collected within the city of Vitoria, Brazil. Cryptococcus neoformans was isolated and identified using standard biochemical assays in ten samples. PCR amplification with primer M13 and orotidine monophosphate pyrophosphorylase (URA5) gene-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis discerned serotypes and genotypes within this species. All isolates were serotype A (C. neoformans var. grubii) and genotype VNI. The two alternative alleles a and α at the mating type locus were determined by PCR amplification and mating assays performed on V8 medium. All isolates were MAT α mating type but only 50 percent were able to mate in vitro with the opposite mating type MAT a tester strains (JEC20, KN99a and Bt63). This study adds information on the ecology and molecular characterization of C. neoformans in the Southeast region of Brazil.

O "complexo Cryptococcus neoformans" é constituído por C. neoformans var. neoformans, C. neoformans var. grubii, e C. gattii. Trinta por cento de amostras de excrementos de pombos coletados dentro da cidade de Vitória, Brasil, foram positivas para Cryptococcus neoformans, espécie identificada por testes bioquímicos convencionais. Amplificação por PCR com primer M13 e análise por orotidine monophosphate pyrophosphorylase (URA5) gene-"restriction fragment length polymorphism" (RFLP) distinguiram sorotipos e genotipos dentro desta espécie. Todos os isolados ambientais foram sorotipo A (C. neoformans var. grubii) e genotipo VNI. Os dois alelos alternativos a e α do locus "mating type" foram determinados por PCR e por testes de "mating" em meio V8. Todos os isolados foram "mating type" tipo MAT α mas somente 50 por cento foram capazes de conjugar in vitro com cepas MAT a, de "mating type" oposto (JEC20, KN99a e Bt63). Este estudo adiciona informações sobre a ecologia e caracterização molecular de cepas ambientais de C. neoformans, isoladas na região sudeste do Brasil.

Primeiro isolamento ambiental de Cryptococcus gattii no Estado do Espírito Santo / First isolation of Cryptococcus gattii from the environment in the State of Espírito Santo

A presença de Cryptococcus gattii foi investigada em diferentes regiões do Estado do Espírito Santo. A maioria (73) das amostras foi coletada de árvores localizadas em lugares públicos de Vitória; 47 amostras foram coletadas de áreas preservadas ou ainda com pouco impacto humano, situados nos arredores desta cidade, a altitudes entre 0 e 900m acima do nível do mar e 48 de árvores nativas das regiões norte e sul do estado. As amostras foram coletadas de ocos e troncos de árvores com auxílio de swab e resultaram em 2 (1,2 por cento) isolados de Cryptococcus neoformans, 2 (1,2 por cento) de Cryptococcus gattii e 1 (0,6 por cento) de Cryptococcus laurentii. A espécie Cryptococcus gattii foi encontrada somente em árvores nativas da região norte, áreas que ainda apresentam resquícios de Floresta Atlântica, enquanto todas as amostras obtidas de vinte e duas espécies de árvores localizadas em área urbana não permitiram a detecção de Cryptococcus gattii. Esses resultados mostram uma possível relação entre ocorrência de Floresta Atlântica e Cryptococcus gattii e confirma que o meio ambiente é fonte de infecção desse fungo.

The presence of Cryptococcus gattii was investigated in different regions of the State of Espírito Santo. The largest number (73) of samples was collected from trees located in public places in Vitória; 47 came from preserved areas or areas with only minor human impact, surrounding this city, at altitudes from 0 to 900m above sea level; 48 came from trees native of the northern and southern regions of the state. The samples were collected from tree hollows and trunks by of swabs and yielded two isolates (1.2 percent) of Cryptococcus neoformans, two (1.2 percent) of Cryptococcus gattii and one (0.6 percent) of Cryptococcus laurentii. The species Cryptococcus gattii was found only in native trees from the northern region, in areas that still have remains of the Atlantic Forest, while none of the samples from any of the 22 tree species located in urban areas was able to show the presence of Cryptococcus gattii. These results show a possible relationship between the presence of Atlantic Forest and occurrences of Cryptococcus gattii. They confirm that the environment is a source of infection with this fungus.